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親和層析(immunoaffinity chromatography,iac),或親和色譜,是利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特-的親和力進(jìn)行分離的方法。 親和層析的應(yīng)用主要是生物大分子的分離、純化。
親和層析測(cè)試應(yīng)用
一種基于層析測(cè)試(ict)試紙的親和層析測(cè)試。有別于普通-檢測(cè),該試紙?zhí)峁┝丝焖俚脑\斷手段。使用ict,-無(wú)需使用實(shí)驗(yàn)室,即可在-的床邊進(jìn)行測(cè)定。 ict檢測(cè)對(duì)引起微生物高度特異。
注意:整個(gè)純化過(guò)程盡量不要讓柱子干燥!
--3ml柱管取出上方堵頭,減去上堵頭螺紋下-部分,插回柱子上,另一端與20ml針筒固定后使用;將1ml柱管上方堵頭取出后斜剪斷,然后再插回柱子上(柱管內(nèi)偶見(jiàn)有小氣泡屬正,F(xiàn)象,-親和柱公司,不影響親和柱的使用);
--準(zhǔn)確移取上述混勻?yàn)V液,注入針筒中,調(diào)節(jié)針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過(guò)親和柱;
--用20ml 水沖洗柱子(對(duì)于飼料及玉米加工副產(chǎn)品等顏色較深的樣液,先用10ml 0.1%吐溫20-pbs清洗,再用10 ml 10%水沖洗柱子,之后用10ml水沖洗柱子。),流速1秒/滴,棄去流出液,直至2~3ml空氣通過(guò)柱體,-親和柱,-柱子內(nèi)沒(méi)有殘余液體;
--準(zhǔn)確加入1.5ml(色譜級(jí))洗脫,流速自然重力,-親和柱,直至2~3ml空氣通過(guò)柱體,-柱子內(nèi)沒(méi)有殘余液體。收集全部洗脫液,進(jìn)行相關(guān)測(cè)定。
親和層析是一種吸附層析,-親和柱廠家,抗原(或)和相應(yīng)的(或抗原)發(fā)生特-結(jié)合,而這種結(jié)合在一定的條件下又是可逆的。
所以將抗原(或)固相化后,就可以使存在液相中的相應(yīng)(或抗原)選擇性地結(jié)合在固相載體上,借以與液相中的其他蛋白質(zhì)分開(kāi),達(dá)到分離提純的目的。此法具有有效、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。
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