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elisa試劑盒——elisa實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

背景深，全部呈有色（通常的elisa背景值od<0.2）

1 洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留洗液準(zhǔn)確配制；充分洗滌，-殘留elisa試劑盒，靜置15秒，-拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，-殘留elisa試劑盒公司，否則易造成污染。

2 底物污染，未避光保存，出現(xiàn)顏色棄去底物，重新配置

3 樣品稀釋液污染棄去稀釋液，重新配置

4 吸頭重復(fù)使用，未洗凈或消毒不- 吸頭盡可能-使用

5 不正確的孵育時(shí)間，溫度（尤其是底物孵育的時(shí)間）常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。完全按照說(shuō)明書(shū)要求。

6 偶聯(lián)抗體（streptavidin-hrp）濃度過(guò)高按照說(shuō)明書(shū)調(diào)整到合適的濃度

7 elisa板子不正確的貯存酶標(biāo)板貯存于2-8 ℃；使用結(jié)合力低點(diǎn)的elisa板

8 沒(méi)有正確封閉在標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中加入動(dòng)物蛋白或延長(zhǎng)封閉時(shí)間

9 樣本溶血- 建議使用非溶血或輕微溶血樣本，-溶血樣本會(huì)導(dǎo)致背景偏高。

elisa試劑盒——會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題及解決辦法

陰性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值低于陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值。

a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法：試劑加完后，需輕敲盤(pán)四周使其充分混合均勻。

b.原因：洗板過(guò)程發(fā)生問(wèn)題。

解決辦法：請(qǐng)-監(jiān)控洗板過(guò)程，-殘留elisa試劑盒，洗完后立即進(jìn)行下一步驟。

c.原因：添加樣品或酶標(biāo)記物的量不一致。

解決辦法：請(qǐng)使用已校正過(guò)的移液槍?zhuān)?其與吸頭之間有高度密合性。

elisa試劑盒——elisa實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

1 錯(cuò)誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品，重懸充分

2 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤按照說(shuō)明書(shū)要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

3 標(biāo)準(zhǔn)品污染使用-的滅菌吸頭，標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8 ℃

4 錯(cuò)誤的倍比稀釋步驟按照說(shuō)明書(shū)倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品

5 波長(zhǎng)選擇錯(cuò)誤 tmb為底物和以opd為底物的試劑盒均有使用，而前者比色波長(zhǎng)為450nm，后者為492nm。雙波長(zhǎng)比色分析優(yōu)于單波長(zhǎng)。

6 標(biāo)準(zhǔn)品混用不同批號(hào)試劑勿混用

7 試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，-殘留elisa試劑盒報(bào)價(jià)，溫度太高，標(biāo)準(zhǔn)品失活盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫

8 elisa未終止而直接檢測(cè)450nm和620nm tmb顯色需終止后檢測(cè)，否則會(huì)出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。（數(shù)值仍有梯度規(guī)律）

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