g 蛋白活性檢測試劑盒-武漢紐斯特生物公司

儲存條件

試劑盒的成分在試劑盒的有效期限內(nèi)必須存放于4°c條件下保存。

試劑（試劑盒內(nèi)不提供，由實驗者自行配置）

1.  -和未-的細胞裂解物；

2.  蛋白酶抑制l劑；

3.  4 °c 搖桿或者搖床；

4.  0.5 m edta (ph 8.0)；

5.  1 m mgcl2；

6.  2x reducing sds-page sample buffer；

7.  電泳和免l疫印跡相關試劑；

8.  免l疫印跡緩沖液tbst (10 mm tris-hcl，g 蛋白活性檢測試劑盒， ph 7.4， 0.15 m nacl， 0.05%

tween-20)；

9.  免l疫印跡封閉緩沖液 (tbst containing 5% 脫脂奶粉/3% bsa)；

10. pvdf或硝l酸纖維素膜；

11.  二抗；

12.  ecl 檢測試劑；

陽性對照和陰性對照的體外gtpγs/ gdp蛋白質(zhì)上樣量

注意：體內(nèi)細胞-將激l活可用arf 6的大約10％，而體外gtpγs蛋白負載將激l活arf 6的將近90％。

1，將0.5 ml每種細胞提取物等分到兩個微量離心管中（或使用1 μg純化的arf 6蛋白）。

2，向每個試管中加入20 μl 0.5 m edta（終濃度為20 mm）。

3，將5 μl 100 xgtpγs（至100 μm，終濃度）加到一個試管中（陽性對照）。

4，在第二個試管中加入5 μl 100 x gdp（至1 mm，終濃度）（陰性對照）。

5，在攪拌下將試管在30°c孵育30分鐘。

6，通過將試管放在冰上并添加32.5 μl 1 m mgcl2（至60 mm，終濃度）來停止加載。