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he染色流程是什么,很多人都不知道,今天跟著小編一起來(lái)學(xué)習(xí)一下,切片的好壞直接影響-診斷的及時(shí)與準(zhǔn)確性。因此一張高的he染色切片,是實(shí)驗(yàn)室必須掌握的技術(shù)之一。he染色目前在國(guó)內(nèi)國(guó)外病理診斷上被
廣泛采用,常規(guī)的染色方法。下面一起來(lái)看he染色的基本順序。一般切片的片子應(yīng)在60-70度左右的烤箱中烘烤30分鐘以才可以進(jìn)行染色?偟膩(lái)說(shuō)是一個(gè)時(shí)間較長(zhǎng)的過(guò)程。
1.樣品制備
對(duì)于貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,胰酶-,調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后,取出細(xì)胞爬片,用pbs 洗滌3次。2.樣品固定 95%-固定20min,pbs洗滌2次,每次1min。3.染核 蘇mu
素染液染色2-3min,自來(lái)水洗滌。4.分色 鏡下觀察,若細(xì)胞核染色過(guò)深,用1%-酒精溶液分色數(shù)秒,自來(lái)水洗滌。 5.染胞質(zhì) 浸入伊紅染液染色1min,樺木木質(zhì)部切片,自來(lái)水洗滌。6.封片 吹干或自然晾gan細(xì)胞爬片后,中性樹(shù)膠封片。
以上六點(diǎn)就是he染色的基本步驟,大家可以參考一下哦
常見(jiàn)的生物切片,厚度一般在幾微米的程度,這種厚度制作起來(lái)比較簡(jiǎn)單,除了可以使用自動(dòng)化的設(shè)備來(lái)切片之外,手動(dòng)操作也能切到這種厚度,而且完夠滿足光學(xué)顯微鏡下觀察的標(biāo)準(zhǔn)。不過(guò)在的科研領(lǐng)域里,需要觀察更細(xì)微的細(xì)胞結(jié)構(gòu),甚至需要從分子的層面來(lái)進(jìn)行研究,這時(shí)候就需要用到電子顯微鏡。然而電子顯微鏡也需要更薄的樣品,切片至少要達(dá)到0.1微米的厚度,而這種切片也就被稱為是超薄切片,在很多實(shí)驗(yàn)研究里需要厚度達(dá)到50納米,顯然手i操作是無(wú)法達(dá)到這種厚度的。那么在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下是怎樣做成這種超薄生物切片的呢?首先是需要進(jìn)行-的固定,因?yàn)樵谌绱吮〉某叨戎拢坏镜募?xì)胞結(jié)構(gòu)都已經(jīng)被完全破壞,而且其中的細(xì)胞器也都被切開(kāi),里面的生物酶會(huì)釋放出來(lái),并且在很短的時(shí)間內(nèi)使細(xì)胞結(jié)構(gòu)遭到破壞。所以就需要在取得樣品之后盡快進(jìn)行固定,要求在一-分鐘之 內(nèi)完成這項(xiàng)操作,然后再使用對(duì)應(yīng)的材料來(lái)做透明化以及包埋,接下來(lái)還需要配合的切片機(jī)來(lái)完成切片的過(guò)程,從而達(dá)到理想的厚度。
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