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引物退火

在pcr循環(huán)過程中，控制引物退火步驟的溫度是很重要的。如果溫度太高，引物退火的效率會(huì)降低。太低，它的特-就會(huì)降低，這可能導(dǎo)致非特-產(chǎn)物的擴(kuò)增，降低你的pcr的整體效率。

為了確定退火步驟的溫度，可以建立重復(fù)的pcr反應(yīng)，pcr儀廠家，每個(gè)反應(yīng)使用不同的退火溫度進(jìn)行測(cè)試。

另外，pcr儀多少錢，也可以使用帶有梯度塊的pcr擴(kuò)增儀。梯度區(qū)塊允許在整個(gè)區(qū)塊內(nèi)同時(shí)使用一系列的溫度，這意味著可以同-估多個(gè)退火溫度。一些pcr擴(kuò)增儀配備了分段式溫度塊，而不是一體式溫度塊，這允許同時(shí)使用范圍的溫度。

pcr的早設(shè)想 -研究已有100多年的歷史，本世紀(jì)60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術(shù)，pcr儀，korana于1971年早提出-體外擴(kuò)增的設(shè)想：“經(jīng)過dna變性，與合適的引物雜交，用dna聚合酶延伸引物，并不斷重復(fù)該過程便可trna基因”。

　　pcr的實(shí)現(xiàn)

　　1985年美國(guó)pe-cetus公司人類遺傳研究室的mullis 等發(fā)明了具有劃時(shí)代意義的聚合酶鏈反應(yīng)。其原理類似于dna的體內(nèi)，只是在試管中給dna的體外合成提供以致一種合適的條件－－-摸板dna ，寡核苷酸引物，小型pcr儀，dna聚合酶，合適的緩沖體系，dna變性、復(fù)性及延伸的溫度與時(shí)間。

依據(jù)空氣流的動(dòng)力學(xué)原理，以冷熱氣流為介質(zhì)升降溫度。優(yōu)點(diǎn)：變溫迅速，擴(kuò)增效果好，適合于微量、快速pcr；反應(yīng)器不受形狀-，管外無(wú)需涂液體石蠟；測(cè)定管內(nèi)液體溫度作為控溫依據(jù)，顯示溫度真實(shí)-；易于用微電腦設(shè)定復(fù)雜的變溫程序；易于制成重量較輕的便攜式儀器，適合外出作業(yè)。缺點(diǎn)：以室溫為溫度下限，低溫難控制，對(duì)空氣流的動(dòng)力學(xué)要求較高，需-設(shè)計(jì)才能使各管溫度均勻。

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