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生長(zhǎng)-之培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮培養(yǎng)基、dmso、無(wú)菌塑料冷凍保存管(nalgene 5000-0020)、等速降溫機(jī)
(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘->;-20℃30分鐘->;-8o℃16~18小時(shí)(或隔夜)->;液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí),以防止胞內(nèi)冰晶過(guò)大,200-074-400凍存袋代理,造成細(xì)胞大量消失,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-8o℃冰箱中。
(2)程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-8o℃以下) -120℃,200-074-401凍存袋代理,再放在液氮槽長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。
1. 如用液氮罐存放樣品,包裹組織的鋁箔或冷凍保存管轉(zhuǎn)入樣本袋時(shí),請(qǐng)按以下步驟進(jìn)行:把樣本袋(紗布袋等)放入液氮中冷凍一下,cs250凍存袋代理,而后將液氮冷卻的組織放入樣本袋
2. 如用廣口容器液氮暫存,建議用進(jìn)口高凍存管,油性筆標(biāo)記后,樣品迅速放入管中,凍存袋代理,擰緊后迅速放入液氮中。然后再轉(zhuǎn)移到-溫冰箱中保存。
3.直接干冰中保存并郵寄的,建議全部用進(jìn)口凍存管,油性筆標(biāo)記后,樣品迅速放入經(jīng)干冰預(yù)冷的凍存管中,放入樣品袋,埋入干冰中,密封包裝后,運(yùn)輸。
利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。 細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或dmso,可使溶液冰點(diǎn)降低,加之在緩慢-條件下,細(xì)胞內(nèi)水分透出,減少了冰晶形成,從而避免細(xì)胞損傷。 采用慢凍快融的方法能較好地-細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開(kāi)始為-1 到 -2℃/min,當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速,到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。
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