pcr-南京英瀚斯生物科技-熒光定量pcr

二、大腸菌群檢驗(yàn)方法:

由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的-，即:需氧及兼性厭氧、在37°c能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽胞。因此大腸菌群的檢測(cè)一般都是按照它的定義進(jìn)行。 目前國(guó)內(nèi)采用的進(jìn)出口食品大腸菌群檢測(cè)方法主要有和原商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法在檢測(cè)程序上略有不同。

(一):采用三步法，即:乳糖發(fā)酵試驗(yàn)、分離培養(yǎng)和證實(shí)試驗(yàn)。乳糖發(fā)酵試驗(yàn):樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。36士1c培養(yǎng)48土2h，觀察是否產(chǎn)氣。分離培養(yǎng):將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，36士1°c培養(yǎng)18-24h，觀察菌落形態(tài)。證實(shí)試驗(yàn):挑取平板上的菌落，進(jìn)行革蘭氏染色觀察。同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管36士1°c培養(yǎng)24土2h，觀察產(chǎn)氣情況。

報(bào)告:

根據(jù)證實(shí)為大腸陽(yáng)性的管數(shù)，實(shí)時(shí)熒光定量pcr，查mpn表，報(bào)告每100ml ( g)大腸菌群的mpn值。具體操作參見(jiàn)gb4789. 3-94 <--食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群測(cè)定>

(二)原商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，等效采用美國(guó)fda的標(biāo)準(zhǔn)方法，用于對(duì)出口食品中的大腸進(jìn)行檢測(cè)。本方法采用兩步法：推測(cè)試驗(yàn):樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管lst肉湯。36士1c培養(yǎng)48士2h，觀察是否產(chǎn)氣。證實(shí)試驗(yàn):將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽(bglb)肉湯管中，36士1°c培養(yǎng)48士2h，觀察是否產(chǎn)氣。以bglb產(chǎn)氣為陽(yáng)性。查mpn表，熒光定量pcr，報(bào)告每ml(g)樣品中大腸菌群的mpn值。具體操作參見(jiàn)sn0169-92<--進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸檢驗(yàn)方法>

蛋白提取

大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液， 少數(shù)與脂類(lèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于-、-等有ji溶劑中，pcr，因些，可 采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶。

(一)水溶液提取法

稀鹽和緩沖系統(tǒng)的水溶液對(duì)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好、溶解度大、是提取蛋白質(zhì)常用的溶劑，-，通常用量是原材料體積的1-5倍，提取時(shí)需要均勻的攪拌，以利于蛋白質(zhì)的溶解。提取的溫度要視有效成份性質(zhì)而定。一方面，多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高而增大，因此，溫度-于溶 解，縮短提取時(shí)間。但另一方面. ，溫度升高會(huì)使蛋白-性失活，因此，基于這一點(diǎn)考慮提取蛋白質(zhì)和酶時(shí)一般采用低溫( 5度以下)操作。為了避免蛋白質(zhì)提以過(guò)程中的降解，可加入蛋白 水解酶抑zhi劑(如二yi--，碘yi酸等)。