細胞-英瀚斯-流式細胞實驗

1、操作步驟 [方法一]：

(1) 細胞培養(yǎng)：取 6 孔培養(yǎng)板 (或用 35 mm 培養(yǎng)皿)，向每孔中加入 2 ml 含 1～2×105 個細胞培養(yǎng)液，37℃ co2 培養(yǎng)至 40%～60% 匯合時 (匯合過分，轉(zhuǎn)染后不利篩選細胞)。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在聚-乙稀管中制備以下兩液 (為轉(zhuǎn)染每一個孔細胞所用的量)a 液：用不含培養(yǎng)基稀釋 1-10 μg dna，流式細胞實驗，終量 100μl，b 液：用不含培養(yǎng)基稀釋 2-50 μglr，終量 100μl，輕輕混合 a、b 液，室溫中置 10-15 分鐘，稍后會出現(xiàn)微濁現(xiàn)象，但并不妨礙轉(zhuǎn)染 (如出現(xiàn)沉淀可能因 lr 或 dna 濃度過高所致，應(yīng)酌情減量)。

(3) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用 2 ml 不含培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入 1 ml 不含培養(yǎng)液。

(4) 轉(zhuǎn)染：把 a/b 復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃ 溫箱置 6～24 小時，吸除無轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(5) 其余處理如觀察、篩選、檢測等與其它轉(zhuǎn)染法相同。

注意：轉(zhuǎn)染時切勿加，細胞，對轉(zhuǎn)染效率有很大影響。