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做好對(duì)照
正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,玉米赤霉烯酮elisa試劑盒公司,以-實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說明有非特-反應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)條件的選擇
在elisa中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,玉米赤霉烯酮elisa試劑盒廠家,其中包括:
(1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚乙烯、聚丙-和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否-。
(2)包被(或抗原)的選擇:將(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求ph在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,玉米赤霉烯酮elisa試劑盒,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽性標(biāo)本的od值。選擇od值大而蛋白量少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3)酶標(biāo)記工作濃度的選擇:首先用直接elisa法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4)酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是-、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如opd等)有潛在的-作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不-、靈敏度高的供氫體,如tmb和abts是較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是h2o2在臨用前加入。
1 洗滌不充分,洗后未拍干,樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留 洗液準(zhǔn)確配制;充分洗滌,靜置15秒,拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用,不要反復(fù)使用,否則易造成污染。
2 底物污染,玉米赤霉烯酮elisa試劑盒,未避光保存,出現(xiàn)顏色 棄去底物,重新配置
3 樣品稀釋液污染 棄去稀釋液,重新配置
4 吸頭重復(fù)使用,未洗凈或消毒不 吸頭盡可能-使用
5 不正確的孵育時(shí)間,溫度(尤其是底物孵育的時(shí)間) 常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。完全按照說明書要求。
6 偶聯(lián)抗體(streptavidin-hrp)濃度過高 按照說明書調(diào)整到合適
7 elisa板子不正確的貯存 酶標(biāo)板貯存于2-8 ℃;使用結(jié)合力低點(diǎn)的elisa板
8 沒有正確封閉 在標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中加入動(dòng)物蛋白或延長封閉時(shí)間
9 樣本溶血- 建議使用非溶血或輕微溶血樣本,-溶血樣本會(huì)導(dǎo)致背景偏高。
elisa試劑盒解凍與存放:-20℃取出后建議放入2~8℃冰箱中解凍約,每隔一段時(shí)間輕輕搖晃均勻,不可直接放入溫度較高處解凍,避免因溫度改變太大,造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,其下降。若短期無法用完一瓶,建議無菌分裝,再放回冷凍,避免反復(fù)凍融。4℃長時(shí)間保存后的變性脂蛋白及纖維蛋白,形成絮狀物-差。
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