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內(nèi)切酶-武漢友名生物

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    2021-8-20

董先生
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dna-性內(nèi)切酶酶切

影響條件:dna純度、緩沖液、溫度條件及-性內(nèi)切酶本身都會影響-性內(nèi)切酶的活性。大部分-性內(nèi)切酶不受rna或單鏈dna的影響。

處理方法:當(dāng)微量的污染物進入-性內(nèi)切酶貯存液中時,會影響其進一步使用,因此在吸取-性內(nèi)切酶時,每次都要用新的吸管頭。如果采用兩種-性內(nèi)切酶,必須要注意分別提供各自的zui適鹽濃度。若兩者可用同一緩沖液,則可同時水解。若需要不同的鹽濃度,則低鹽濃度的-性內(nèi)切酶必須首先使用,隨后調(diào)節(jié)鹽濃度,再用高鹽濃度的-性內(nèi)切酶水解。也可在第yi個酶切反應(yīng)完成后,用等體積酚/氯1仿抽提,加0.1倍體積3mol/l naac和2倍體積無水-,混勻后置-70℃低溫冰箱30分鐘,離心、干燥并重新溶于緩沖液后進行第二個酶切反應(yīng)。


dna-性內(nèi)切酶酶切是一項基于dna-性內(nèi)切酶的基因工程技術(shù),其基本原理是利用-性內(nèi)切酶對dna上特定序列的識別,來確定切割位點并實現(xiàn)切割,從而獲得所需的特定序列。

生物體內(nèi)能識別并切割特異的雙鏈dna序列的一種內(nèi)切-酶。它是可以將外來的dna切斷的酶,即能夠-異源dna的侵入并使之失去活力,但對自己的dna卻無損害作用,這樣可以保護細胞原有的遺傳信息。由于這種切割作用是在dna分子內(nèi)部進行的,故名-性內(nèi)切酶(簡稱-酶)。


錯位切割含目的基因的dna部分片段和運載體一形成黏性末端

單酶切:同一種-酶分別切割含目的基因dna部分片段與運載體。這是較簡單的一種方法,含目的基因的dna部分片段與運載體在同種-酶作用下形成相同的黏性末端,內(nèi)切酶,這兩個黏性末端間能通過堿基間的配對而連接,進而形成重組dna分子。

用同裂酶去切割含目的基因dna部分片段與運載體。有一些來源不同的-酶識別核苷酸順序和切割位置都相同,這類酶稱為同裂酶(同切酶或異源同工酶)。同裂酶產(chǎn)生同樣的切割,形成相同的黏性末端。






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