pcr引物設計-pcr-英瀚斯生物科技公司

rip

技術概述

rip是研究體內蛋白與rna互作的重要技術。該技術先用甲醛等試劑交聯細胞內的“蛋白-rna”互作復合物，裂解細胞后，用靶蛋白特異的抗l體(或標簽抗l體)做免l疫沉淀，獲得“靶蛋白-rna”互作復合物，去交聯分離其中的rna;針對預測的靶蛋白結合rna的序列設計引物，pcr實驗室，

做qpcr實驗，實時定量pcr，驗證預測的rna是否與靶蛋白有結合，或者將分離出來的rna做高通量測序，pcr引物設計，篩選到可能與靶蛋白結合的rna。

技術流程

細胞交聯-***細胞裂解-***免l疫共沉淀***去交聯***rna分離***建庫***高通量測序(或qpcr)。

rna酶（rnase）是導致rna降解主要的物質。此酶非常穩(wěn)定，在一些的條件下只可暫時失活，但-因素去除后又迅速恢-性。常規(guī)高溫高壓滅菌方法和蛋白抑制ji不能使所有的rnase完全失活。

1.它廣泛存在于人的皮膚上，因此制備rna時必須戴手套

2.rnase的又一污染源是取液器。根據取液器制造商的要求對取液器進行處理。一般情況下采用以depc配制的70%-擦洗取液器的內部和外部，pcr，可基本達到要求。

3. 塑料制品、玻璃和金屬物品的處理

（1）塑料制品：盡量使用-無菌塑料制品。已標明rnase-free的塑料制品，如沒有開封使用過，通常不必再處理。