rala kit-武漢紐斯特生物

電泳和轉(zhuǎn)移

1向聚丙l烯-凝膠（17%）中加入15μl/孔的下拉上清液。而且建議包括預(yù)染色mw標(biāo)準(zhǔn)（作為成功轉(zhuǎn)入的指標(biāo)步驟3）。

2按照制造商的說明進(jìn)行sds-page。

3按照制造商的說明，將凝膠蛋白轉(zhuǎn)移到pvdf或硝化纖維膜上說明。

免l疫印跡檢測(cè)（所有步驟均在室溫下攪拌）

1在電印跡步驟之后，將pvdf膜浸入100%甲l醇中15次

然后在室溫下干燥5分鐘。

如果使用-纖維素，則應(yīng)跳過此步驟。

2室溫下用5%脫脂奶粉或3%牛血l清白蛋白在tbst中封閉1小時(shí)

不斷地?cái)噭?dòng)。

用抗arl1單克l隆抗l體孵育，新鮮稀釋1:50~1000

（取決于樣品中arl1蛋白質(zhì)的含量）5%脫脂奶粉或3%

bsa/tbst，室溫下持續(xù)攪拌1-2小時(shí)或4o

過夜。

3用tbst清洗吸水膜三次，每次5分鐘。

4用二級(jí)抗l體（例如山羊抗鼠igg，hrp結(jié)合物）培養(yǎng)膜，

在室溫下，在5%脫脂奶粉或3%bsa/tbst中新鮮稀釋1:1000，1小時(shí)

不斷地?cái)噭?dòng)。

5用tbst清洗吸水膜三次，每次5分鐘。

6使用您選擇的檢測(cè)方法，如ecl。