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lncrna測(cè)序

長(zhǎng)鏈非編碼rnas（long non-coding rnas，實(shí)時(shí)熒光定量pcr，lncrnas）一般是指長(zhǎng)度大于200 nt的rna，位于細(xì)胞核內(nèi)或胞漿中，不參與蛋白質(zhì)編碼功能，以rna形式在多種層面上（表觀遺傳調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等）調(diào)控基因的表達(dá)水平，在生命活動(dòng)中具有重要作用。

長(zhǎng)鏈非編碼rna測(cè)序（long non-coding rna sequencing，lncrna-seq）是一種使用特定方法降低樣本中rrna 的豐度，對(duì)富集到的 rna進(jìn)行-構(gòu)建，再對(duì)高通量測(cè)序儀產(chǎn)出的數(shù)據(jù)進(jìn)行信息分析的研究方法。lncrna-seq可-獲得樣本中全部的lncrnas信息，對(duì)lncrnas的類別、功能進(jìn)行的深入分析，從而快速準(zhǔn)確地獲得與特定生物學(xué)過程（例如發(fā)育、-等）相關(guān) lncrna信息。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)

操作步驟

1.在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。

1qpcr buffer

5 μl

dntp mix( 2mm )

4 μl

引物1(10pm)

μl 2

引物2 ( 10pm)

2μl

taq酶(2u/ul)

1 μl

dna模板( 50ng-1μg/μl )

1 μl

加ddh2o至

μl 50

視pcr儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置pcr儀上執(zhí)行擴(kuò)增。-般:在93°c

預(yù)變性3-5min ，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段: 93°c 40s***58°c 30s***72°c 60s ，循環(huán)30-35

次，后在72°c保溫7min。

3.結(jié)束反應(yīng)， pcr產(chǎn)物放置于4°c待電泳檢測(cè)或-20°c長(zhǎng)期保存。

4. pcr的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100ul進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以

除去石蠟油;否則，直接取5- 10μl電泳檢測(cè)。