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rpa技術(shù)主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈-(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈dna結(jié)合蛋白(ssb)和鏈置換dna聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，等溫-試劑盒代理，反應(yīng)溫度在37°c左右。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-dna復(fù)合物，能在雙鏈dna中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，等溫-試劑盒價(jià)格，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動dna合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的dna鏈與ssb結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進(jìn)行得非�？�，等溫-試劑盒報(bào)價(jià)，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。rpa擴(kuò)增的基礎(chǔ)體系(twistamp? basic)含有dna擴(kuò)增所需的所有試劑，我們只要準(zhǔn)備好引物和模板就行。擴(kuò)增結(jié)果可以通過凝膠電泳進(jìn)行終點(diǎn)檢測，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

在這個基礎(chǔ)體系中添入不同的酶和探針，就可以實(shí)現(xiàn)多樣化的rpa應(yīng)用。舉例來說，twistamp? exo結(jié)合了exo探針技術(shù)和-外切酶iii，能實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)的實(shí)時讀取，就像熒光定量pcr一樣。不過反應(yīng)終點(diǎn)的擴(kuò)增子總量有所減少，適合獲得強(qiáng)熒光信號進(jìn)行動力學(xué)分析，不適合終點(diǎn)檢測(比如跑膠)。將exo探針技術(shù)、-外切酶iii和逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合起來，可以一步實(shí)現(xiàn)rna模板的實(shí)時擴(kuò)增。