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就dna探針和rna探針的比較,dna探針在雜交過程中會(huì)出現(xiàn)探針雙鏈之間退火的可能,也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體,從而影響其滲透能力。而rna 探針的應(yīng)用,將提高dna-rna雜交子的熱穩(wěn)定性。
tips:rna探針因其單鏈、高分子結(jié)合力、可適應(yīng)高溫雜交的特性,其檢測特-和靈敏度均優(yōu)于dna探針。常用的rna探針標(biāo)記方法為構(gòu)建質(zhì)粒后進(jìn)行轉(zhuǎn)率合成。通過pcr擴(kuò)增的方法,可以更方便地進(jìn)行rna探針的制備;rna探針合成后,還需驗(yàn)證其對(duì)目標(biāo)片段檢測的靈敏度和特-。
雜交液中的陽離子濃度通過靜電排斥作用影響了雜交體之間的鏈穩(wěn)定性,較高的鹽濃度將增加雜交體的穩(wěn)定性。大于0.4m的na離子濃度,對(duì)tm值、雙鏈復(fù)性速率的影響不大,但隨著na離子濃度的降低,將-影響tm值和雙鏈復(fù)性速率。
-葡聚糖具有很強(qiáng)的水合性,高濃度的-葡聚糖會(huì)使得-分子無法獲得周邊親水環(huán)境,增加了探針濃度,加快雜交反應(yīng)速率。
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