細(xì)胞系-英瀚斯-細(xì)胞

小鼠成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞共培養(yǎng)模型的建立

細(xì)胞之間的相互調(diào)控作用奠定基礎(chǔ).方法利用24 h內(nèi)新生小鼠顱骨和4~8周齡成年小鼠四肢長(zhǎng)分別分離、培養(yǎng)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞，采用間接接觸的培養(yǎng)模式將接種了骨sui單核細(xì)胞的玻片或骨片置入提前24 h接種了成骨細(xì)胞的培養(yǎng)皿中進(jìn)行共培養(yǎng).共培養(yǎng)-定時(shí)間后進(jìn)行破 骨細(xì)胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase，trap染色鑒定和骨吸收功能檢測(cè)，并進(jìn)一 步采用rt- pcr對(duì)破骨細(xì)胞標(biāo)志酶基因基質(zhì)金屬蛋白酶.9(mmp-9)、trap 和組織蛋白酶k (cathepsin k )的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果共培養(yǎng)5天后-trap(+)多核細(xì)胞形成13天trap(+ )多核細(xì)胞數(shù)目達(dá)到高峰;骨吸收陷窩在共培養(yǎng)7天后開(kāi)始出現(xiàn)，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，陷窩面積呈增加趨勢(shì);破骨細(xì)胞標(biāo)志基因trap在共培養(yǎng)3天時(shí)開(kāi)始表達(dá)，而mmp-9和cathepsin k則在共培養(yǎng)5天后表達(dá)結(jié)論共培養(yǎng)體系中成骨細(xì)胞對(duì)破骨細(xì)胞調(diào)控作用--的破骨細(xì)胞具有噬骨能力，該共培養(yǎng)模型可用于成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞之間的相互調(diào)控作用研究.

細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的污染及解決方法

支原體污染

支原體是隱蔽的污染物，不能通過(guò)過(guò)濾去除。顯微鏡下沒(méi)有任何可見(jiàn)的支原體污染跡象，比如細(xì)胞病變和濁度或 ph 值變化（即使在-污染的培養(yǎng)基中），這樣就會(huì)導(dǎo)致我們產(chǎn)生錯(cuò)誤的-。而在牛中，支原體是常見(jiàn)的微生物之一。

解決方法：通常的過(guò)濾滅菌方法對(duì)支原體沒(méi)有影響。細(xì)胞一旦被支原體污染，細(xì)胞，-是對(duì)重要的細(xì)胞系，必須去除支原體，細(xì)胞培養(yǎng)，一般的方法有、抗和抗與補(bǔ)體聯(lián)合。值得注意的是，支原體很-的結(jié)構(gòu)特征是沒(méi)有細(xì)胞壁。因此，它對(duì)作用于細(xì)胞壁的生物合成（如 β-內(nèi)-類(lèi)、萬(wàn)古等）完全不敏感，并且通常對(duì)多粘菌素、-和類(lèi)具有耐藥性。相反，四環(huán)素類(lèi)和大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)對(duì)支原體的抑制作用很強(qiáng)，而-糖苷類(lèi)和氯的抑制作用較弱。