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試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)吸附實驗(elisa).已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的hrp。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物a、b,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
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做好對照
正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,酶聯(lián)elisa試劑盒,以-實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特-反應(yīng)。
實驗條件的選擇
在elisa中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚乙烯、聚丙-和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚乙烯凹孔板。不管何種載體,酶聯(lián)elisa試劑盒,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,酶聯(lián)elisa試劑盒價格,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否-。
(2)包被(或抗原)的選擇:將(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求ph在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的od值。選擇od值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3)酶標(biāo)記工作濃度的選擇:首先用直接elisa法進行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4)酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是-、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如opd等)有潛在的-作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不-、靈敏度高的供氫體,如tmb和abts是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是h2o2在臨用前加入。
elisa法是診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的病種等方面的診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認為elisa法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于-標(biāo)本的檢查,而且由于-之內(nèi)可以檢查幾百甚千份標(biāo)本,因此,酶聯(lián)elisa試劑盒報價,也適合于流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定,而且也可用于測定-中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的-方法。因此elisa法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大,可概括四個方面:
1、酶染色各種細胞內(nèi)成份的定位。
2、研究抗酶的合成。
3、顯現(xiàn)微量的沉淀反應(yīng)。
4、定量檢測-中抗原或成份。
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