熒光定量pcr-pcr-英瀚斯

逆轉(zhuǎn)錄-構(gòu)建及包裝  

      逆轉(zhuǎn)錄-（retrovirus）是一類rna-。在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以-rna為模板合成cdna再通過dna、轉(zhuǎn)錄、翻譯等過程形成-顆粒。逆轉(zhuǎn)錄-表達(dá)系統(tǒng)是一種新的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)，由逆轉(zhuǎn)錄-載體、輔助載體（表達(dá)-包裝需要的蛋白質(zhì)）和包裝細(xì)胞系組成。逆轉(zhuǎn)錄-載體在外源基因表達(dá)、基因沉默、、生物制藥等得到廣泛的應(yīng)用。逆轉(zhuǎn)錄-載體主要優(yōu)點(diǎn)：轉(zhuǎn)染范圍廣，可以各種細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)入的外源基因可完全融合，對細(xì)胞率高，pcr實(shí)驗(yàn)室，細(xì)胞不產(chǎn)生病變，可建立細(xì)胞系長期持續(xù)表達(dá)外源基因。

     逆轉(zhuǎn)錄-載體系統(tǒng)共有兩部分組成：包裝細(xì)胞系和缺陷-本身。在逆轉(zhuǎn)錄-載體中，去除了正常的蛋白編碼序列而保留了和包裝信號，pcr，通過分子技術(shù)將目的基因插入此載體上，熒光定量pcr，而包裝細(xì)胞系能提供-載體包裝成-粒子所需的結(jié)構(gòu)蛋白。當(dāng)重組-載體導(dǎo)入包裝細(xì)胞后，缺陷-載體和包裝細(xì)胞的互補(bǔ)作用共同完成-裝配，該-顆�？善渌�宿主細(xì)胞，此時(shí)目的基因進(jìn)入該細(xì)胞并整合到細(xì)胞基因組中，導(dǎo)致插入序列在宿主細(xì)胞中表達(dá)，產(chǎn)生目的蛋白。宿主細(xì)胞不能像包裝細(xì)胞那樣為缺失結(jié)構(gòu)基因的逆轉(zhuǎn)錄-提供結(jié)構(gòu)蛋白，因而在宿主細(xì)胞內(nèi)不會產(chǎn)生新的毒顆粒，-了該載體在生物制品領(lǐng)域的生物安全性問題。

外顯子測序

外顯子組測序（exome-seq）是對定向富集的基因組dna進(jìn)行高通量測序，它能夠以相對低的費(fèi)用對人類外顯子組進(jìn)行拷問。2009年，外顯子組捕獲工具的出現(xiàn)，讓外顯子組測序這種技術(shù)迅速紅起來。到目前為止，已有超過1萬個(gè)外顯子組被測序。

如今有多家公司推出了外顯子組捕獲試劑，包括羅氏nimblegen、安捷倫、illumina，實(shí)時(shí)定量pcr，還有現(xiàn)在的華大基因。這些方法究竟孰優(yōu)孰劣，斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)系的研究人員對市場上三個(gè)主流的外顯子組測序平臺進(jìn)行了比較。該研究結(jié)果發(fā)表在上。研究人員利用安捷倫、illumina和nimblegen的外顯子組測序平臺對同一個(gè)人類-樣品進(jìn)行分析。他們的結(jié) 果表明，nimblegen平臺作為一個(gè)使用高密度重疊探針的平臺，盡管覆蓋了較少的基因組區(qū)域，但在靈敏檢測小的變異時(shí)所需的測序量也少。在同樣獲得80m測序數(shù)據(jù)的情況下，nimblegen有97%的目標(biāo)序列達(dá)到10x以上的測序-，而其他產(chǎn)品只有90%。而安捷倫和illumina的探針能夠在低密度下捕獲更多數(shù)量的變異。此外，illumina還捕獲了未翻譯的區(qū)域，這是nimblegen和安捷倫平臺無法靶定的。研究人員還比較了同一樣品的外顯子組測序和全基因組測序（wgs），顯示外顯子組測序能夠檢測到wgs錯(cuò)過的小變異。

除了文中提到了三個(gè)主流平臺，外顯子組捕獲方面的新產(chǎn)品也在不斷推出，研究人員的選擇也將更廣泛。羅氏nimblegen即將推出新一代的外顯子液相捕獲產(chǎn)品。這一新產(chǎn)品將可捕獲64m的基因組序列，包括外顯子以及mirna，它含與其他nimblegen液相捕獲產(chǎn)品相同的2.1m高密度探針，以高xiao、均一、特異、的定向捕獲。