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¥來(lái)電咨詢(xún)
2021-1-7
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1. 在使用前,將所有試劑放置30分鐘,平衡至室溫。
2. 用試劑預(yù)先潤(rùn)洗槍頭在使用;取各種樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和試劑必需更換槍頭。
3. 移取標(biāo)準(zhǔn)品和樣品到微孔底部。
4. 從微孔的邊緣加入試劑,以避免污染。
5. 本試劑盒使用可拆分的微孔酶標(biāo)條,使用者可根據(jù)樣品量多少進(jìn)行拆分。未使用的酶標(biāo)條保持干燥,密封于試劑盒提供的鋁封袋中,于4℃保存。微孔酶標(biāo)條需安裝在相應(yīng)的框架上使用。
6. 在加入顯色底物前,c- kit,-微孔內(nèi)沒(méi)有殘留的洗滌液。微量殘留的洗滌液可能導(dǎo)致分析結(jié)果的變化。
對(duì)于生長(zhǎng)的組織培養(yǎng)液中的細(xì)胞,首先移除培養(yǎng)基,然后加入0.1m hcl處理細(xì)胞。孵育10分鐘并觀(guān)察細(xì)胞是否被裂解;如果裂解不充分,接著孵育10分鐘并觀(guān)察。以大于600g離心力于室溫離心,收集上清直接用于實(shí)驗(yàn)。臨用前在0.1m hcl中加入0.1%至1%濃度的triton-x 100可增強(qiáng)細(xì)胞和組織裂解。在這個(gè)濃度范圍內(nèi),去污劑并不干擾試驗(yàn)的結(jié)合部位,但是會(huì)適度的增加光密度值。含有triton的樣品需利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)估計(jì)濃度,為了較精l確的測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)需以相同方式稀釋。取1 ml細(xì)胞培養(yǎng)上清加入10μl濃-,600g離心力于室溫離心,上清液直接用于實(shí)驗(yàn)測(cè)定分析。
camp濃度為16.0pmol/ml的樣品,用0.1m hcl進(jìn)行連續(xù)七次1:2梯度稀釋。將實(shí)際的camp濃度和測(cè)定的camp濃度繪制圖表。該直線(xiàn)的斜率為1.000,相關(guān)系數(shù)為0.999。
交叉反應(yīng)
部分相關(guān)化合物的交叉反應(yīng)由競(jìng)爭(zhēng)elisa測(cè)定。將可能的交叉反應(yīng)物溶解到試劑盒分析緩沖液中,濃度從500pmol/ml至500,000pmol/ml。這些樣品通過(guò)-化在camp競(jìng)爭(zhēng)分析中被測(cè)定,通過(guò)比較樣品中交叉試劑的實(shí)際濃度,可以計(jì)算出交叉反應(yīng),并用百分比(%)表示。
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