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武漢紐斯特生物技術(shù)有限公司提供g蛋白活性檢測試劑盒-武漢紐斯特生物。

檢測步驟

ι。活性cdc42 pull-down實驗

1. 等分0.5-1 ml的細(xì)胞裂解物至微量離心管中。

2. 向管中加入1ml的1x assay/lysis 緩沖液。

3. 向管中加入1ul的活性cdc42單克l隆抗l體。

4. 用渦旋振蕩儀將protein a/g凝膠柱充分混勻，然后快速的吸出20ul懸浮珠漿液加入離心管中。

5. 將管置于4°c條件下孵育1h，并輕輕的進行搖動。

6. 5000g，離心1分鐘。

7. 棄上清，這一步要非常小心以避免珠子的損失。

8. 用0.5 ml的1x assay/lysis緩沖液洗滌珠子三次，離心并棄去上清。

9. 后一次洗滌后，小心的移去所有的上清。

10. 用20ul的2x sds-page樣品緩沖液重懸樣品。

11. 樣品煮沸5min。

12. 5000g，離心10s。

小g蛋白是從屬于細(xì)胞調(diào)節(jié)因子中的一個超家族。rho家族是小g蛋白中的一個亞家族，它在細(xì)胞運動、細(xì)胞分裂以及基因轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮主要作用。而本試劑盒中的cdc42就屬于rho亞家族中的一種， cdc42參與生理活動過程中其分子結(jié)構(gòu)會呈現(xiàn)出2種相互轉(zhuǎn)換的形式：與gtp結(jié)合的激l活狀態(tài)和與gdp結(jié)合的非活性狀態(tài)。

目前cdc42蛋白活性的檢測主要是依據(jù)小gtp酶cdc42可以與p21活化激酶（pak）的p21結(jié)合區(qū)域（pbd）結(jié)合，使pak活化從而發(fā)揮生物學(xué)功能，g蛋白活性檢測試劑盒，進而間接的進行cdc42活性l功能的監(jiān)測。然而此方法在檢測過程中存在著一定的局限性比如gtp水解成gdp的速度過快以及cdc42-gtp結(jié)合蛋白與p21結(jié)合區(qū)域之間較低的親和力，導(dǎo)致這種檢測方法的重復(fù)性較差。

試劑盒成分

特-識別cdc42活性構(gòu)象的鼠單克l隆抗l體（anti-active cdc42， mouse monoclonalantibody (catalog no. 26905)）：小管裝--30ul (抗l體濃度是1mg/ml)，抗l體溶于pbs（ph7.4）并包含50%的甘油和0.05%的-l化鈉。此抗l體可以特-識別所有脊椎動物中的cdc42-gtp。

protein a/g agarose (catalog no. 30301) ：小管裝—400ul包含200ul protein a/g agarose 和200ul 20%-溶液。（使用時溶液需要充分混勻，再吸取）

5x assay/lysis buffer (catalog no. 30303)：小瓶裝—30ml包含250 mm tris-hcl (ph 8.0)， 750 mm nacl， 50 mm mgcl2， 5 mm edta， 5% triton x-100。

特-識別cdc42活性構(gòu)象的兔多克l隆抗l體（anti-cdc42， rabbit polyclonal antibody (catalog no.21010)）：小管裝--30ul (抗l體濃度是1mg/ml)，抗l體溶于pbs（ph 7.4）并包含有 50%的甘油。

100 x gtpγs (catalog no. 30302) ：小管裝—100ul (10 mm) ，實驗中0.5ml細(xì)胞裂解液使用 5ul gtpγs標(biāo)記。

100 x gdp (catalog no. 30304) ：小管裝—100ul (100 mm) ，實驗中0.5ml細(xì)胞裂解液使用5ul gdp標(biāo)記。

g蛋白活性檢測試劑盒-武漢紐斯特生物(圖)由武漢紐斯特生物技術(shù)有限公司提供。武漢紐斯特生物技術(shù)有限公司在生物化工這一領(lǐng)域傾注了諸多的熱忱和熱情，武漢紐斯特一直以客戶為中心、為客戶創(chuàng)造價值的理念、以品質(zhì)、服務(wù)來贏得市場，衷心希望能與社會各界合作，共創(chuàng)成功，共創(chuàng)。相關(guān)業(yè)務(wù)歡迎垂詢，聯(lián)系人：樂經(jīng)理。

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