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組織切片與預(yù)處理
冰凍切片:新鮮組織也可在取材后,直接置入液氮中迅速驟冷,冷凍切片后,4%-固定5~10min,也可保存在-70℃中待用。雜交前切片迅速恢復(fù)至室溫并干燥,0.1mol pbs洗三次,2×ssc洗10min,滴加預(yù)雜交液室溫孵育1h。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的-公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原-白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開展各類動(dòng)、植物、-、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。
對(duì)分散在若干個(gè)瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進(jìn)行篩選時(shí),可采用該方法。將這些菌落歸并到一個(gè)瓊脂主平板以及已置于第二個(gè)瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時(shí)間后,對(duì)菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。 用無菌-將各個(gè)菌落先轉(zhuǎn)移至濾膜上,再轉(zhuǎn)移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應(yīng)按一定的格子進(jìn)行劃線接種(或打點(diǎn))。每菌落應(yīng)分別劃線于兩個(gè)平板的相同位置上。后,在濾膜和主平板上同時(shí)劃一個(gè)含有非重組質(zhì)粒的菌落。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的-公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原-白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開展各類動(dòng)、植物、-、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。
與其他原位雜交技術(shù)相比,熒光原位雜交具有很多優(yōu)點(diǎn),主要體現(xiàn)在:fish不需要性同位素標(biāo)記,更經(jīng)濟(jì)安全。fish的實(shí)驗(yàn)周期短,探針穩(wěn)定性高,特-好,定位準(zhǔn)確,能迅速得到結(jié)果。fish通過多次化學(xué)反應(yīng),使雜交信號(hào)增強(qiáng),靈敏度提高,其靈敏度與性探針相當(dāng)。多色fish通過在同一個(gè)核中顯示不同的顏色可同時(shí)檢測(cè)多種序列。既可以在玻片上顯示中期染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變化。也可以在懸液中顯示間期染色體dna的結(jié)構(gòu)。 [1]
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