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武漢默沙克生物????科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免疫學(xué)試劑盒、生化試劑、elisa試劑盒、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的-產(chǎn)品,服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。
機(jī)體被微生物感1染后,先產(chǎn)生igm抗1體,然后產(chǎn)生igg抗1體。經(jīng)過一段時(shí)間,igm抗1體量逐漸減少而消失,而igg抗1體可長(zhǎng)期存在,在--后可持續(xù)數(shù)年之久。
igm抗1體一般為保護(hù)性抗1體具有免疫性。因此igm抗1體的測(cè)定,對(duì)某些傳1染病如甲型肝1炎有較高的-診斷價(jià)值。右圖為為甲型肝1炎病1人血1清中igg抗1體和igm抗1體出現(xiàn)的時(shí)間和水平。
1.3 抗原抗1體反應(yīng)
1.3.1 可逆性
抗原與抗1體結(jié)合形成抗原抗1體復(fù)合物的過程是一種動(dòng)態(tài)平衡,其反應(yīng)式為:
ag+ab***ag·ab
抗1體的親和力(affinity)是抗原抗1體間的固有結(jié)合力,可以用平衡常數(shù)k表示:
k=[ag·ab]/[ag][ab]
ag·ab的解離程度與k值有關(guān)。高親和力抗1體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合,兩者結(jié)合牢固,不易解離。解離后的抗原或抗1體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性,因此可用親和層析法來(lái)提純抗原或抗1體。在抗血1清中,特-的igg抗1體僅占總igg中的極1小部分。用親和層析法提取的特-抗1體,稱為親和層析純抗1體,應(yīng)用于免疫測(cè)定中可得到-的效果。
武漢默沙克生物????科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免疫學(xué)試劑盒、生化試劑、elisa試劑盒、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的-產(chǎn)品,服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。
1.3.4 敏感性
在測(cè)定血1清中某一物質(zhì)的含量時(shí),化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平,酶反應(yīng)測(cè)定法的敏感度約為5~10μg/ml,免疫測(cè)定中凝膠擴(kuò)散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。標(biāo)記的免疫測(cè)定的敏感度可提高數(shù)千倍,達(dá)ng/ml水平。例如,用放1射免疫測(cè)定法或酶免疫測(cè)定法測(cè)定hbsag,其敏感度可達(dá)0.1ng /ml。
1.4 免疫測(cè)定在-檢驗(yàn)中的應(yīng)用
由于各種抗原成份,elisa試劑盒,包括小分子的半抗原,均可用以制備特-的抗血1清或單克1隆抗1體,利用此抗1體作為試劑就可檢測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原,因此免疫測(cè)定的應(yīng)用范圍極廣,在-檢驗(yàn)中可用于測(cè)定:
1) -中的各種蛋白質(zhì),包括含量極1少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。
武漢默沙克生物????科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免疫學(xué)試劑盒、生化試劑、elisa試劑盒、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的-產(chǎn)品,服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。
3、染色弱 原因 解決辦法 抗1體濃度過低,孵育時(shí)間過短 提高抗1體濃度,孵育時(shí)間不能少于60分鐘 試劑超過有效使用期 及時(shí)更換試劑 操作中,滴加試劑時(shí)緩沖液未瀝干,致 使試劑稀釋 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液(但防止切片干燥) 室溫太低,低于15℃ 若室溫低于15度,要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘(或4℃冰 箱過夜) 蛋白封閉過度 封閉時(shí)間不要超過10分鐘 4、染色陰性 原因 解決辦法 操作步驟錯(cuò)誤 重新試驗(yàn),設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照 組織中無(wú)抗原 設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照片,以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤 仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無(wú)誤
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