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制備液相色譜儀的功能: 泵形式:串聯(lián)雙柱塞浮動(dòng)式密封圈。 泵頭自沖洗功能。 “自吸式單向閥”技術(shù),可延長(zhǎng)密封圈使用壽命! 〕绦蚧娜軇╊惡蛪嚎s因子,液相分離,可自動(dòng)補(bǔ)償! ⊥暾念A(yù)清洗功能,更于快速溶劑更換。 制備液相色譜儀主要用于以下領(lǐng)域: 1、天然化學(xué)、中藥化學(xué):這是國(guó)內(nèi)目前廣泛的使用方法,為了弄清楚植物中的微量有效成分,開放手工色譜柱早已不夠用了,幾乎每個(gè)搞天然藥化的實(shí)驗(yàn)室都至少有一臺(tái)液相,土豪實(shí)驗(yàn)室人手一臺(tái)液相! 2、蛋白純化:相對(duì)于前者,蛋白純化的起步要稍微晚一點(diǎn),但是發(fā)展很迅速。同時(shí),由于外國(guó)儀器廠家在這個(gè)領(lǐng)域的優(yōu)勢(shì)不算太大,目前國(guó)內(nèi)也在這個(gè)領(lǐng)域加快發(fā)展,搶占地盤! 3、雜質(zhì)純化:由于合成工藝并不能做到100%的產(chǎn)率,往往伴有副產(chǎn)品,如何獲得微量的雜質(zhì)并確定結(jié)構(gòu)和含量,這就得靠液相色譜! 4、手性化合物的制備:這個(gè)主要是有機(jī)合成和方法學(xué)的在用。
反相色譜(rpc)是指利用非極性的反相介質(zhì)為固定相,極性有機(jī)溶1劑的水溶液為流動(dòng)相,根據(jù)溶質(zhì)極性(疏水性)的差別進(jìn)行溶質(zhì)分離與純化的洗脫色譜法。與hic一樣,rpc中溶質(zhì)也通過疏水性相互作用分配于固定相表面,但是,rpc固定相表面完全被非極性基團(tuán)所覆蓋,表現(xiàn)出-的疏水性。因此,必須用極性有機(jī)溶1劑或其水溶液進(jìn)行溶質(zhì)的洗脫分離。溶質(zhì)在反相介質(zhì)上的分配系數(shù)取決于溶質(zhì)的疏水性,一般疏水性越大,分配系數(shù)越大。當(dāng)固定相一定時(shí),可以通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的組成調(diào)整溶質(zhì)的分配系數(shù)。rpc主要應(yīng)用于相對(duì)分子低于5000,-是1000以下的非極性小分子物質(zhì)的分析和純化,也可以用于蛋白質(zhì)等生物大分子的分析和純化。由于反相介質(zhì)表面為-疏水性,并且流動(dòng)相為低極性的有機(jī)溶1劑,生物活性大分子在rpc分離過程中容易變性失活,所以,以回收生物活性蛋白質(zhì)為目的時(shí),應(yīng)注意選用適宜的反相介質(zhì)。
反相色譜影響因素(1)柱長(zhǎng)有機(jī)小分子和肽類的分辨率隨柱長(zhǎng)的增加而增加.但是柱長(zhǎng)增加并不能使蛋白質(zhì)和-等生物大分子的分辨率-增加.它們?cè)谳^短的柱子上往往也有-的分離效果。(2)流動(dòng)相的流速。有機(jī)小分子和肽類的分辨率對(duì)流動(dòng)相流速非常敏感。而蛋白質(zhì)和-等生物大分子的分辨率則不然。流速越小,柱子越長(zhǎng),色譜峰的寬度就越大,分辨率就越小。制備色譜上樣過程中的流速對(duì)動(dòng)態(tài)吸附容量影響很大。(3)溫度。溫度上升,流動(dòng)相黏度下降,流動(dòng)速度加快,且流動(dòng)相與固定相之間的傳質(zhì)速度加快,使分辨率增加。同時(shí),溫度上升,分子熱運(yùn)動(dòng)增加,疏水性作用減弱。升高溫度要考慮目標(biāo)物質(zhì)的熱穩(wěn)定性。(4)流動(dòng)相組成。流動(dòng)相的極性越大,溶質(zhì)的分配系數(shù)越大,洗脫時(shí)間越長(zhǎng)。rpc多采用降低流動(dòng)相極性(水含量)的線性梯度洗脫法。水是極性強(qiáng)的溶劑,在反相色譜中常常和基礎(chǔ)溶劑配合使用,向流動(dòng)相中加入不同濃度的、可以與水混溶的有機(jī)溶1劑,以得到不同強(qiáng)度的流動(dòng)相,這些有機(jī)溶1劑稱為修飾劑。反相色譜中的有機(jī)溶1劑。此外,-、-呋1喃、-1醇及二氧六環(huán)也常被用作修飾劑。有機(jī)溶1劑梯度的大小也會(huì)影響分辨率,一般梯度越小,分辨率越大。
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