實際操作時需要注意的是,雖然共價偶聯(lián)的方法優(yōu)于物理吸附,但基于-和羧基的抗體固定方法仍具有一定程度的隨機性,江西微陣列芯片,有時在fab區(qū)(用于結(jié)合抗原)存在易于修飾的-/羧基,在與固體表面偶聯(lián)后會造成抗體的失活。在抗體領(lǐng)域,微陣列芯片檢查,抗體與的偶聯(lián)同樣存在上面所說的問題(由于抗體表面可能存在很多可修飾的-酸,不能確定連在哪個部位
基因芯片(又稱 dna 芯片、生物芯片)技術(shù)就是順應(yīng)這一科學(xué)發(fā)展要求的產(chǎn)物,它的出現(xiàn)為解決此類問題提供了光輝的前景。該技術(shù)系指將大量(通常每平方厘米點陣密度高于 400 )探針分子固定于支持物上后與標(biāo)記的樣品分子進行雜交,通過檢測每個探針分子的雜交信號強度進而獲取樣品分子的數(shù)量和序列信息。通俗地說,微陣列芯片制作,就是通過微加工技術(shù) ,將數(shù)以萬計、乃至百萬計的特定序列的dn-段(基因探針),有規(guī)律地排列固定于2cm2 的硅片、玻片 等支持物上,構(gòu)成的一個二維dna探針陣列,與計算機的電子芯片十分相似,所以被稱為基因芯片;蛐酒饕糜-工作 。
微陣列芯片應(yīng)用流程
1)制備靶點
從生物標(biāo)本中提取核苷酸并進行標(biāo)記;
(2)雜交
讓靶點與芯片上的cdna或寡核苷酸序列進行孵育;
(3)獲取數(shù)據(jù)
掃描與探針雜交的靶點表現(xiàn)出來的信號強度
(4)數(shù)據(jù)分析
從大量數(shù)據(jù)中得出具有生物學(xué)意義的結(jié)論
微陣列芯片技術(shù)通過測定能夠與探針雜交的mrna的數(shù)量,反映表達此mrna的基因的轉(zhuǎn)錄情況,芯片的構(gòu)建首先要根據(jù)研究的需要選擇基因及相應(yīng)的探針,其次是從標(biāo)本中提取mrna,并制備出靶點,微陣列芯片服務(wù),然后將靶點加入芯片,進行孵育雜交、沖洗掉沒有雜交的樣品以及掃描等操作,得到原始數(shù)據(jù),再將這些數(shù)據(jù)進行標(biāo)準(zhǔn)化和統(tǒng)計分析后得到結(jié)論,構(gòu)造適當(dāng)?shù)奈㈥嚵行酒情_展后續(xù)研究的基礎(chǔ)。
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