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分離抗性突變體一般有如下步驟
(1)在抑制培養(yǎng)基中分離出抗性細(xì)胞系。經(jīng)誘變處理(或供選擇自發(fā)突變)后的細(xì)胞群,通過一步法或多步法從中分離出能夠存活的或相對不受抑制影響的抗性細(xì)胞系作為假定的突變體。
(2)消除漏網(wǎng)的-型細(xì)胞。假定的突變體細(xì)胞系,在含抑制生長濃度選擇劑的培養(yǎng)基中生長,轉(zhuǎn)培幾代,廠房屋頂種菜,以消除可能逃脫選擇劑抑制而漏網(wǎng)的-型細(xì)胞。然后,轉(zhuǎn)到不含選擇劑的培養(yǎng)基中生長,轉(zhuǎn)培幾代以消除可能有對選擇劑上癮的-型細(xì)胞。
(3)在組織培養(yǎng)中表現(xiàn)型的表達(dá)。假定的突變體愈傷組織,在含抑制生長的不同濃度選擇劑的培養(yǎng)基中生長,廈門屋頂種菜,比較各樣假定的突變體,以發(fā)現(xiàn)是否那些愈傷組織無性系都有同樣水平的抗性。
(4)從抗性細(xì)胞系到再生植株。在抗性細(xì)胞系失去分化能力和生成再生植株能力之前,盡快使它們再生出小植株。
(五)突變體的鑒定組織培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的變異稱為體細(xì)胞變異。一般來說,體細(xì)胞變異有外遺傳變異、遺傳變異或兩者兼有。外遺傳變異是離體培養(yǎng)過程中除遺傳變異以外的表型變異的統(tǒng)稱。其機(jī)制目前尚不十分清楚,有人認(rèn)為可能涉及特定條件下基因的選擇表達(dá),不是遺傳物質(zhì)本身改變的結(jié)果。因此,外遺傳變異的基本特征是離開選擇壓力后,喪失變-狀。遺傳變異是dna一級結(jié)構(gòu)上發(fā)生的-的、能夠遺傳的變異,這種變異不是由于遺傳物質(zhì)的分離或者基因重組引起的,而是在組織培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的。
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