pcr技術(shù)的本質(zhì)是體外-擴(kuò)增,加熱使雙鏈dna解開螺旋,在退火溫度條件下引物同模板dna雜交,在taq dna聚合酶,dntps,mg2+和合適ph緩沖液存在條件下延伸引物,重復(fù) “變性***退火***引物延伸”過程至25~40個(gè)循環(huán),呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)大待測樣本中的-拷貝數(shù)。
普通的pcr儀
一次pcr擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的pcr儀,又叫傳統(tǒng)的pcr儀。
用途:主要是做一些簡單的、對單一退火溫度的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。
(1)梯度pcr儀: 一次pcr擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常為12種溫度梯度的普通pcr儀。
用途:研究未知dna退火溫度的擴(kuò)增。
(2)原位pcr:將具有細(xì)胞定位能力的原位雜交技術(shù)運(yùn)用于從細(xì)胞內(nèi)靶dna的定位分析,在細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)基因擴(kuò)增的普通pcr儀。
用途:用于在細(xì)胞的靶dna所在位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增。
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