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盡管如此,通常原位合成方法仍然比較復(fù)雜,除了在基因芯片研究方面享有盛譽(yù)的 affymetrix 等公司使用該技術(shù)合成探針外,微陣列芯片技術(shù)特點(diǎn),其它中小型公司大多使用合成點(diǎn)樣法。后一方法在多聚物的設(shè)計(jì)方面與前者相似,合成工作用傳統(tǒng)的 dna 或多肽固相合成儀以完成,微陣列芯片服務(wù),只是合成后用特殊的自動(dòng)化微量點(diǎn)樣裝置將其以比較高的密度涂布于纖維膜、尼龍膜或玻片上。支持物應(yīng)事-行特定處理,例如包被以帶正電荷的多聚賴酸或--。現(xiàn)在已有比較成型的點(diǎn)樣裝置出售,如美國 biodot 公司的點(diǎn)膜產(chǎn)品以及 cartesian technologies 公司的 pixsys nq/pa 系列產(chǎn)品。前者產(chǎn)生的點(diǎn)陣密度可以達(dá)到 400/cm2 ,后者則可達(dá)到 2500/cm2 。
共價(jià)偶聯(lián)比物理吸附更-一些,天津微陣列芯片,主要表現(xiàn)在它克服了物理吸附的兩個(gè)缺點(diǎn):共價(jià)偶聯(lián)在固體表面的抗體(1)排列取向一定程度上是確定的;(2)不容易脫離到溶液中。賴氨酸、谷氨酸和天冬氨酸等-酸經(jīng)常被作為蛋白質(zhì)修飾的靶點(diǎn),微陣列芯片檢查,其中賴氨酸尤甚(chem. sci., 2017,8, 63-77,chem. sci., 2018, 9, 79–87),其它-酸由于位于蛋白質(zhì)內(nèi)部或反應(yīng)性弱或不可控等原因而很少用于偶聯(lián)。
因此,一般的建議步驟是活化羧基使用ph=5-6的mes緩沖液,之后使用pbs緩沖液調(diào)節(jié)ph=7.2-7.5完成后的偶聯(lián)反應(yīng)。
與edc/nhs類似的是,也可以使用將兩個(gè)含有-的分子連接到一起。比如,先在納米粒子外包一層二氧化硅,通過aptes等試劑引入-,之后通過將-修飾的納米晶和蛋白質(zhì)的-偶聯(lián)到一起。
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