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目前,由于靈敏度所限,多數(shù)方法需要在標(biāo)記和分析前對樣品進(jìn)行適當(dāng)程序的擴(kuò)增,不過也有不少人試圖繞過這一問題,如 mosaic technologies 公司引入的固相 pcr 方法,引物特-強,山東基因芯片,無交叉污染并且省去了液相處理的煩瑣; lynx therapeutics 公司引入的-并行固相法 (massively parallel solid-phase cloning) ,基因芯片分析,可在一個樣品中同時對數(shù)以萬計的 dna 片段進(jìn)行,且無需單獨處理和分離每個。
以合成寡核苷酸探針為例,基因芯片結(jié)果,該技術(shù)主要步驟為:首先使支持物-化,并用光敏保護(hù)基團(tuán)將其保護(hù)起來。每次選取擇適當(dāng)?shù)谋喂饽ぃ?mask )使需要聚合的部位透光,其它部們不透光。這樣,基因芯片報告,光通過蔽光膜照射到支持物上,受光部位的-解保護(hù)。因為合成所用的單體分子一端按傳統(tǒng)固相合成方法活化,另一端受光敏保護(hù)基的保護(hù),所以發(fā)生偶聯(lián)的部位反應(yīng)后仍舊帶有光敏保護(hù)基團(tuán)。因此,每次通過控制蔽光膜的圖案(透光與不透光)決定哪些區(qū)域應(yīng)被活化,以及所用單體的種類和反應(yīng)次序就可以實現(xiàn)在待定位點合成大量預(yù)定序列寡聚體的目的。
由于尚未形成主流技術(shù),生物芯片的形式非常多,以基質(zhì)材料分,有尼龍膜、玻璃片、塑料、硅膠晶片、微型磁珠等;以所檢測的生物信號種類分,有-、蛋白質(zhì)、生物組織碎片甚至完整的;按工作原理分類,有雜交型、合成型、連接型、親和識別型等。由于生物芯片概念是隨著人類基因組的發(fā)展一起建立起來的,所以至今為止生物信號平行分析成功的形式是以一種尼龍膜為基質(zhì)的“cdna陣列”,用于檢測生物樣品中基因表達(dá)譜的改變。折疊
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