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關于層析柱裝柱、使用及相關注意事項
(1)、裝柱前要仔細看填料的使用說明書,大孔樹脂柱規(guī)格,每種填料都有自己的特性,以及特殊的裝柱方法,大孔樹脂柱多少錢,針對不同的空柱,也要注意方法可能不同;這一點非常重要:裝柱包括以后使用中不允許柱內(nèi)進入氣泡(bubble free),柱頭事先也要排除氣泡。
(2)、填料要加水攪拌成均勻懸液,懸液濃度依填料而不同,一般70-85%,迅速倒入空柱內(nèi),或吸或壓,流速和具體步驟看說明書。
(3)、所有柱子盡量做到填料均勻,尤其是用于凝膠層析的柱子。裝柱完成后,大孔樹脂柱,可用柱效測定的方法檢查裝填效果。一個裝填合格的柱子的理論塔板高度應是填料平均粒徑的2-4 倍,在此范圍內(nèi)越小越好。
(4)、選擇合適的泵,**是流速滿足要求,脈沖盡量小。柱塞泵。
(5)、準備上柱的液體應進行過濾,至少是0.45micrometre。
(6)、關于純化,**要考慮的是你的目標:純度、數(shù)量、速度、收率等等,再根據(jù)樣品的具體情況,尤其是目標蛋白的性質(zhì),確定純化策略。通常三步曲:capture、purification、polishing。*步先從大量或復雜樣品-目標蛋白%26ldquo;抓出%26rdquo;,與主要雜質(zhì)分離;再用高選擇性的層析去除絕大部分雜質(zhì);后精細純化,大孔樹脂柱廠家,提供純度至設定目標。到實際工作中,不要死靠三步,也許一步也許四步或更多,具體情況具體分析。所謂%26ldquo;三步%26rdquo;只是一種思路而已。
(7)、至于測序,我想大概不到1mg 應該足夠了。
實驗室常用是什么規(guī)格的層析柱層析柱是凝膠層析技術中的主體,我們研究所用的就是同興玻璃儀器,一般用玻璃管或有機玻璃管。根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數(shù)不同,從而分離的一種層析法。層析柱是凝膠層析技術中的主體,一般用玻璃管或有機玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度,樣品用量大,可加大柱的直徑,一般制備用凝膠柱,直徑大于2厘米,但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外, 直徑加大,洗脫液體體積增大,樣品稀釋度大。玻璃層析柱,開口大,加料快,不需要其他儀器的配合,上方可以做成標準口與其他的標口玻璃儀器相接,但有不容易測量,篩網(wǎng)下方容易殘留很多液體,層析速度較慢,不準確的特點,一般用于對精度要求沒有那么高的實驗,加壓層析柱,兩端一般使用4f材料,耐腐蝕,酸堿性的耐度也可以,中段有玻璃材料的,也有有機玻璃材料的,需要與-泵相結(jié)合,加快層析速度,用泵將料打進,如果沒有泵則使用比較麻煩,F(xiàn)在一般的實驗室都是使用加壓的層析柱,taobao上有賣的。一般層析柱使用的規(guī)格為16mm,26mm,35mm內(nèi)徑,長度在10-50cm之間。
層析柱上柱子后壓力大怎么辦
先試試空白運行,就是不經(jīng)過柱子光走系統(tǒng),看看壓力是多少,檢查是否系統(tǒng)壓力過大。
如果系統(tǒng)壓力正常,則檢查溶液是否澄清,有無沉淀或泛白。
如果溶液沒有問題,檢查柱頭是否堵塞,柱頭前的濾膜是否需要清洗。
然后檢查下填料是否完整,有無被壓碎的填料或者有無雜志吸附在填料上,參照說明書清洗再生下填料。
層析柱壓力過大容易壓碎填料,需要及時暫停減小壓力后繼續(xù)上柱。
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