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對于生長的組織培養(yǎng)液中的細胞，首先移除培養(yǎng)基，然后加入0.1m hcl處理細胞。孵育10分鐘并觀察細胞是否被裂解；如果裂解不充分，接著孵育10分鐘并觀察。以大于600g離心力于室溫離心，收集上清直接用于實驗。臨用前在0.1m hcl中加入0.1%至1%濃度的triton-x 100可增強細胞和組織裂解。在這個濃度范圍內(nèi)，去污劑并不干擾試驗的結(jié)合部位，但是會適度的增加光密度值。含有triton的樣品需利用標準曲線估計濃度，為了較精l確的測定，標準曲線需以相同方式稀釋。取1 ml細胞培養(yǎng)上清加入10μl濃-，600g離心力于室溫離心，上清液直接用于實驗測定分析。
樣品中camp濃度有多種計算方法。x軸表示camp標準品濃度，y軸表示凈光密度的平均值或者百分比值。
1 樣品和標準品的凈光密度(od)平均值的計算：
凈od平均值 = od平均值 － nsb孔od平均值
2 計算不同梯度濃度標準品的結(jié)合率占較大結(jié)合率(b0孔)的百分比，計算公式 如下：
百分比值 = (凈od平均值/ b0孔od平均值)×100
3 繪制凈od平均值或百分比值對camp標準品濃度的logit-log曲線。通過插值即可得到樣品中camp濃度。
武漢紐斯特生物科技有限公司（wuhanneweastbiotechonologyco.ltd），系美國生命科學(xué)試劑供應(yīng)商美國neweastbio在的子公司。公司位于武漢東湖-開發(fā)區(qū)光谷生物城.美國neweastbio-于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，人環(huán)磷酸腺苷 c- elisa，主要產(chǎn)品有小分子、elisa試劑盒、蛋白等，與高校和研究所、大制藥公司、生物科技公司和醫(yī)院等客戶建立了長期穩(wěn)定的合作關(guān)系，產(chǎn)品銷往。
體外用gtpγs/gdp處理蛋白以用作陽性和陰性的對照
注意：在細胞體內(nèi)環(huán)境條件下大約有10%的ras被激l活，而在體外用gtpγs處理大約有90%的ras被激l活。
1.
準備兩個離心管，每個管中各加入0.5 ml的細胞提取物（如果是純的ras蛋白則每個管中加入的蛋白量為1ug）。
2.
每個管中加入20ul 0.5m edta(終濃度即為20 mm)。
3.
一個管中加入5ul的100x gtpγs（終濃度即為100 um）作為陽性對照。另一個管中加入5ul的100x gdp（終濃度即為1 mm）作為陰性對照。
4.
將離心管置于30°c條件下反應(yīng)30 min并不斷攪動。
5.
終止反應(yīng)：將管置于冰上并加入32.5ul 1m mgcl2(終濃度即為60mm)。
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