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使用方法

1. 用生理鹽水將抗原稀釋到2倍zui終濃度（按每針次50μl用量配制）。
備注：使用的抗原用量為
（1）免0疫原性較弱的合成肽每針次10-100μg；
（2）亞單位蛋白抗原每針次1-10μg；
（3）免0疫原性較強(qiáng)的滅活病原微生物和-樣顆粒抗原每針次1-10μg；
（4）腫0瘤細(xì)胞裂解物每針次10-100μg。

2. 37oc水浴中解凍佐劑，充分混勻，無菌條件下取出所需用量（按每針次50μl）與抗原按體積比1:1混勻。

3. 通過后腿小腿肌肉或腹0股0溝皮下0注射免0疫小鼠，每只小鼠注射100μl。

4. 第7天按同樣方式加強(qiáng)免0疫1針。備注：每次免0疫佐劑和抗原現(xiàn)配現(xiàn)用

5. 第014天通過elispot、胞內(nèi)細(xì)胞0因子染色、mhc四聚體染色或其他可行方法檢測脾0臟或-淋巴0結(jié)中的抗原特-cd4+ th1和/或cd8+ ctl反應(yīng)。

試劑與儀器

試劑: pet28a-mrj 轉(zhuǎn) rosetta 菌 0種由本實(shí) 驗(yàn) 室所保存。免0疫佐劑 quickantibody 購自北京康碧泉公司;hat 選擇性培養(yǎng)基、ht 培養(yǎng)基、8-azaguanine 和融合試劑 50% peg 購自美國 sigma 公司; 胎牛血0清及 prmi 1640 培養(yǎng) 基為 hyclone 產(chǎn) 品; 辣根過氧化物酶( hrp) 標(biāo)記山羊抗小鼠 igg ; 8 周齡雌性健康 balb / c 小鼠，本實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng); 小鼠骨0髓瘤細(xì)胞 sp2 /0 由-學(xué)贈(zèng)送，融合前兩星期復(fù)蘇并經(jīng) 8-azaguanine篩選; 其他試劑均為國產(chǎn)分析分析純。

儀器: 二氧化碳培養(yǎng) 箱( thermo) ; 倒置顯微鏡( olympus) ; 細(xì)胞培養(yǎng)耗材，96 孔板、24 孔板、6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板、移液-( corning) ; 1 ml 的 a 蛋白層析柱

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