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1. 第21天按同樣方式加強(qiáng)免0疫1針。備注:每次佐劑和抗原現(xiàn)配現(xiàn)用。
2. 第35天采微量血進(jìn)行elisa測定,抗0體滴度應(yīng)在1:10000-1:10000000范圍內(nèi),隨后即可采全血或按常規(guī)方法進(jìn)行抗原沖擊免0疫和脾細(xì)胞融合。
3. 若抗0體滴度沒有達(dá)到要求,可在第42天按同樣方式加強(qiáng)免0疫1針。備注:通常情況下小鼠只需免0疫2針,而家兔往往需要免0疫3針。
4. 若免0疫3針,可在第52-56天采微量血進(jìn)行elisa測定,抗0體滴度應(yīng)在1:10000-1:1000000范圍內(nèi),隨后即可采全血或按常規(guī)方法進(jìn)行抗原沖擊免0疫和脾細(xì)胞融合。備注:佐劑免0疫效果有時(shí)也與抗原特性有關(guān),若免0疫3針后仍達(dá)不到要求,不建議進(jìn)行更多針次免0疫。
作用機(jī)制:
佐劑增強(qiáng)免0疫應(yīng)答的機(jī)制可能有:改變抗原物理性狀,延長抗原在機(jī)體內(nèi)的存在時(shí)間和保持對免0疫系統(tǒng)的持續(xù)激0活作用,佐劑中的礦物油成分主要起緩釋作用,有利于抗原在體內(nèi)緩慢釋放,8周標(biāo)準(zhǔn)兔多抗制備佐劑,-抗原在體內(nèi)降解,從而更有效地-免0疫系統(tǒng)。使抗原易被巨噬細(xì)胞吞噬,-單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng),增強(qiáng)其對抗原的處理和呈遞抗原的能力。促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖、分化,從而擴(kuò)大和增強(qiáng)機(jī)體的免0疫應(yīng)答的效應(yīng)。
使用方法
1. 用生理鹽水將抗原稀釋到2倍zui終濃度(按每針次50μl用量配制)。
備注:使用的抗原用量為
(1)免0疫原性較弱的合成肽每針次10-100μg;
(2)亞單位蛋白抗原每針次1-10μg;
(3)免0疫原性較強(qiáng)的滅活病原微生物和-樣顆?乖酷槾1-10μg;
(4)腫0瘤細(xì)胞裂解物每針次10-100μg。
2. 37oc水浴中解凍佐劑,充分混勻,無菌條件下取出所需用量(按每針次50μl)與抗原按體積比1:1混勻。
3. 通過后腿小腿肌肉或腹0股0溝皮下0注射免0疫小鼠,每只小鼠注射100μl。
4. 第7天按同樣方式加強(qiáng)免0疫1針。備注:每次免0疫佐劑和抗原現(xiàn)配現(xiàn)用
5. 第014天通過elispot、胞內(nèi)細(xì)胞0因子染色、mhc四聚體染色或其他可行方法檢測脾0臟或-淋巴0結(jié)中的抗原特-cd4+ th1和/或cd8+ ctl反應(yīng)。
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