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動物免0疫
使用 quickantibody 作為免0疫佐劑,對小鼠腿部肌肉注射免0疫,mrj 重組蛋白( 1 μg /ml) 與免0疫佐劑各200 μl 混勻免0疫 6-8 周齡 balb / c 小鼠 4 只,每只注射 100 μl。初次免0疫后第 21 天同樣的方法進行第二次免0疫,第 35 天尾靜脈取少量血做效價檢測,間接 elisa 檢測效價滴度高于 1 ∶ 8 000 則進行沖擊免0疫,沖擊免0疫直接以不加佐劑的 mrj 蛋白對小鼠沖擊免0疫一次,每只 20 μg。沖擊免0疫后 96 h 內(nèi)取脾0臟細(xì)胞做細(xì)胞融合。
作用機制:
佐劑增強免0疫應(yīng)答的機制可能有:改變抗原物理性狀,延長抗原在機體內(nèi)的存在時間和保持對免0疫系統(tǒng)的持續(xù)激0活作用,佐劑中的礦物油成分主要起緩釋作用,有利于抗原在體內(nèi)緩慢釋放,多抗制備佐劑,-抗原在體內(nèi)降解,從而更有效地-免0疫系統(tǒng)。使抗原易被巨噬細(xì)胞吞噬,-單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng),增強其對抗原的處理和呈遞抗原的能力。促進淋巴細(xì)胞的增殖、分化,從而擴大和增強機體的免0疫應(yīng)答的效應(yīng)。
試劑與儀器
試 劑: pet28a-mrj 轉(zhuǎn) rosetta 菌 0種 由 本 實 驗 室 所保存。免0疫佐劑 quickantibody 購自北京康碧泉公司;hat 選擇性培養(yǎng)基、ht 培養(yǎng)基、8-azaguanine 和融合試劑 50% peg 購自美國 sigma 公司; 胎牛血0清及 prmi 1640 培 養(yǎng) 基 為 hyclone 產(chǎn) 品; 辣 根 過 氧 化 物 酶( hrp) 標(biāo)記山羊抗小鼠 igg ; 8 周齡雌性健康 balb / c 小鼠,本實驗室飼養(yǎng); 小鼠骨0髓瘤細(xì)胞 sp2 /0 由-學(xué)贈送,融合前兩星期復(fù)蘇并經(jīng) 8-azaguanine篩選; 其他試劑均為國產(chǎn)分析分析純。
儀器: 二 氧 化 碳 培 養(yǎng) 箱( thermo) ; 倒 置 顯 微 鏡( olympus) ; 細(xì)胞培養(yǎng)耗材,96 孔板、24 孔板、6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板、移液-( corning) ; 1 ml 的 a 蛋白層析柱
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