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1.免0疫:本產(chǎn)品與抗原混合攪拌能很快形成油包水狀態(tài),在1:1-1:2情況下都能形成穩(wěn)定的乳液,1:2乳化較1:1粘稠些,乳化后滴水?dāng)?shù)周不散;經(jīng)多品種抗原多種屬動物測試免0疫效果極0好,由于乳
化徹0底牢固,因此跟其他佐劑相比比較不容易出現(xiàn)免0疫耐受現(xiàn)象。
2.單抗腹0水制備:將佐劑注射balb/c小鼠腹腔,每只0.3-0.5ml處理腹腔15天左右(一般12-18天),然后注射雜交瘤細(xì)胞,建議每只注射80萬-100萬個。腹0水會比普通佐劑晚出1.5天-2天,2周快速鼠多抗制備佐劑,但通
常情況下腹0水的量是普通佐劑出量的1.5-2倍,且單抗腹0水效價不變。
使用方法
1. 用生理鹽水將抗原稀釋到2倍zui終濃度(按每針次50μl用量配制)。
備注:使用的抗原用量為
(1)免0疫原性較弱的合成肽每針次10-100μg;
(2)亞單位蛋白抗原每針次1-10μg;
(3)免0疫原性較強(qiáng)的滅活病原微生物和-樣顆?乖酷槾1-10μg;
(4)腫0瘤細(xì)胞裂解物每針次10-100μg。
2. 37oc水浴中解凍佐劑,充分混勻,無菌條件下取出所需用量(按每針次50μl)與抗原按體積比1:1混勻。
3. 通過后腿小腿肌肉或腹0股0溝皮下0注射免0疫小鼠,每只小鼠注射100μl。
4. 第7天按同樣方式加強(qiáng)免0疫1針。備注:每次免0疫佐劑和抗原現(xiàn)配現(xiàn)用
5. 第014天通過elispot、胞內(nèi)細(xì)胞0因子染色、mhc四聚體染色或其他可行方法檢測脾0臟或-淋巴0結(jié)中的抗原特-cd4+ th1和/或cd8+ ctl反應(yīng)。
細(xì)胞融合
取已免0疫小鼠的脾0臟用不完全培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液,計數(shù)。收集選擇生長狀態(tài)-的 sp2 /0 骨0髓瘤細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液,計數(shù)。將 sp2 /0 骨0髓瘤細(xì)胞與免0疫小鼠的脾細(xì)胞以 1∶ 10 在 50% 的 peg1500 作用下融合[8]。加 hat 選擇培養(yǎng)基重懸混勻后滴入到鋪有飼養(yǎng)層細(xì)胞的 3 塊 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板。放入37 ℃ ,含 5% 的 co2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
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